利用PCR方法鉴定hiTAIL-PCR扩增产物中的质粒骨架片段

编号 zgly0001577682

文献类型 期刊论文

文献题名 利用PCR方法鉴定hiTAIL-PCR扩增产物中的质粒骨架片段

作者 曹媛  杨云  徐化全  刘洋  王丹阳 

作者单位 西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室 

母体文献 植物学报 

年卷期 2018年01期

年份 2018 

分类号 Q943.2 

关键词 hiTAIL-PCR  T-DNA突变体  侧翼序列  质粒骨架  克隆 

文摘内容 T-DNA突变体是研究基因功能的重要资源。高效热不对称交错PCR(hiTAIL-PCR)是克隆突变体中T-DNA插入位点侧翼序列的常用方法。然而我们发现,利用hiTAIL-PCR克隆到的一些侧翼序列并不对应于宿主的染色体DNA序列,而是质粒的骨架DNA片段。通过设置1组RB-S4/AC1或者LB-A4/AC1对照反应,用PCR方法鉴定了hiTAIL-PCR扩增产物中位于T-DNA侧翼的质粒骨架片段。在后续分析中,通过排除这些片段,提高了利用hiTAIL-PCR获得宿主染色体DNA片段的效率。同时,通过调整反应程序,使得整个PCR的反应时间也大为缩短。在拟南芥(Arabidopsis thaliana)T-DNA突变体drf1侧翼序列的克隆实例中,对照反应的引入将hiTAIL-PCR中需鉴定的22条扩增产物降至4条,效率提高了81.8%。