仁用杏ISSR分析体系的正交优化

编号 zgly0001371369

文献类型 期刊论文

文献题名 仁用杏ISSR分析体系的正交优化

作者 白锦军  魏安智  王佳  张亚转 

作者单位 西北农林科技大学生命学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2009年06期

年份 2009 

分类号 S662.2 

关键词 仁用杏  ISSR  正交优化 

文摘内容 本研究以仁用杏丰仁为试材,采用经改良的CTAB法提取实验材料幼叶基因组DNA。利用正交设计法,从Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量5种因素4水平出发,构建和优化仁用杏ISSR-PCR反应体系,并采用直观分析和方差分析相结合的方法分析正交实验结果,最终建立了仁用杏ISSR-PCR最佳反应体系总体积20μL:1.5UTaqDNA聚合酶、2.0mmol/LMgCl2、0.15mmol/LdNTPs、0.35μmol/L引物、30～60ng模板DNA。在优化体系的基础上筛选出13个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定每个引物的最适退火温度。经对最佳反应体系和程序进行了验证,结果显示该体系具有扩增稳定性。