H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

编号 zgly0001727637

文献类型 期刊论文

文献题名 H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

作者 张诚  郭承意  周雷  仝丽娜  文英  李增魁  张红见  贺晓龙  贾跃宁  康明  高小龙 

作者单位 青海大学农牧学院 

母体文献 西北农林科技大学学报:自然科学版 

年卷期 2021,49(1)

页码 10-16

年份 2021 

分类号 S852.659.5 

关键词 H9N2禽流感病毒  纳米抗体  酵母双杂交 

文摘内容 【目的】构建H9N2禽流感病毒(AIV)纳米抗体(Nbs)酵母双杂交文库,为后期筛选H9N2 AIV Nbs奠定基础。【方法】以H9亚型禽流感疫苗(F株)免疫双峰驼,当血凝抑制(HI)抗体滴度大于1∶2~4时,颈静脉采集血液,分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,用反转录试剂盒合成第一链cDNA,再以此为模板,通过巢式PCR扩增Nbs基因片段。将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养约4 d,收集平板上的全部菌落,构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定。【结果】经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后,双峰驼HI抗体滴度可达1∶2~9;通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因。对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明,其库容为2.4×10~8,滴度为4.2×10~9 CFU/mL,插入重组率为95.6%;随机挑取10个克隆测序,结果显示均符合Nbs序列特征,且为独立克隆,表明文库多样性良好。【结论】成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,且文库各项指标均达到了要求。