羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选

编号 zgly0001723686

文献类型 期刊论文

文献题名 羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选

作者 高海岗  刘晓文  王晓泉  刘秀梵  查丽莎  游冬  李星星 

作者单位 扬州大学  苏州市动物卫生监督所  安徽农业大学  无锡中德伯尔生物技术有限公司 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2020年12期

年份 2020 

分类号 S852.4 

关键词 纳米抗体  孔雀石绿  噬菌体展示  酶联免疫吸附测定  羊驼 

文摘内容 孔雀石绿(malachite green,MG)是一种易溶于水和乙醇等的基础染料,可在多种行业应用,并曾用于水生动物多种疾病如真菌病、寄生虫病、细菌性疾病等的治疗。但因其具有致癌等毒副作用,目前已被禁用。然而市场上仍有在水产品违法使用MG的现象,因此需要加强对该药品残留的检测。本研究选择羊驼免疫库筛选抗MG纳米抗体,通过噬菌体ELISA筛选高亲和力和特异性的纳米抗体。通过辅助噬菌体M13的救援,使得纳米抗体基因(VHH)与噬菌体外壳蛋白基因融合表达,从而使得VHH蛋白展示在噬菌体表面,通过有限稀释筛选和多次洗脱的办法,获得含有目的基因的单个噬菌克隆;将重组质粒PMES4-VHH转化到表达细胞中,进行体外表达。最后采用NI-NTA柱进行His标签纯化,得到抗MG纳米抗体,并进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果显示:噬菌体文库成功构建,库容为3.2×10~8 cfu/mL;通过ELISA筛选,得到16个具有抑制效果的噬菌体克隆,经对噬菌体基因测序并翻译,得到2种氨基酸序列;将重组质粒转化至表达菌株表达、纯化,最后得到大小约为15 kDa的抗MG纳米抗体,从而为MG的下一步检测奠定了基础。