百脉根AD-cDNA文库的构建及与结瘤因子受体NFR1相互作用蛋白的鉴定

编号 zgly0000522744

文献类型 期刊论文

文献题名 百脉根AD-cDNA文库的构建及与结瘤因子受体NFR1相互作用蛋白的鉴定

学科分类 220.1040;森林土壤学

作者 朱浩  朱辉  杨绮  陈春芬  张忠明 

作者单位 华中农业大学生命科学技术学院／农业微生物学国家重点实验室 

母体文献 华中农业大学学报 

年卷期 2007,26(6)

页码 793-798

年份 2007 

分类号 S154.381  Q785 

关键词 百脉根  AD-cDNA文库  NFR1  酵母双杂交 

文摘内容 以豆科植物百脉根为材料，构建了AD-cDNA表达文库。其库容量达到每3μg DNA 2×10^6酵母转化子，空载率为12.5%，平均片段长度为1.5 kb。以百脉根结瘤因子受体激酶基因1(nod factor receptor kinase，NFR1)蛋白激酶结构域的DNA片段(NFR1-PK)为诱饵，利用酵母双杂技术，筛选与NFR1相互作用的基因。结果在含X-gal的四缺选择性培养基上筛选到120个克隆。经质粒抽取、PCR鉴定、回转酵母验证得到80个阳性克隆。对26个确定阳性克隆的外源片段进行测序和同源性分析，通过NCBI数据库比对分析鉴定含有JAB1、AT-RICH结构域等4个与NFR1-PK相互作用的不同基因。通过半定量RT-PCR观察在百脉根中这些基因的表达情况，其结果可为进一步研究NFR1基因的功能和调控机制提供材料。