水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

编号 zgly0001545652

文献类型 期刊论文

文献题名 水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

作者 王贵升  尹斐斐  田夫林  王金宝 

作者单位 山东大学生命科学学院  山东省动物疫病预防与控制中心  威海市动物疫病预防控制中心 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2017年02期

年份 2017 

分类号 S852.61 

关键词 大肠杆菌  肺炎克雷伯氏菌  不动杆菌  荧光定量PCR 

文摘内容 依据Gen Bank中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的部分已知序列,选取大肠杆菌的uid A基因、肺炎克雷伯氏菌的khe基因和不动杆菌的sec E基因,利用Primer Premier 5设计引物,选出扩增序列的3对引物及相应的Taqman探针,uidA、khe、secE探针5’端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基因,3’端标记BHQ1淬灭荧光基因。通过优化反应条件,建立一种同时检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的诊断方法。特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌,其最低检测限分别为2×10-1 CFU/μL、9.2×10-1 CFU/μL和4.3×10-1 CFU/μL。整个检测扩增在2小时内完成。该结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌。