柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达

编号 zgly0001517097

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达

作者 朱雪龙  黄兵  韩红玉  赵其平  朱顺海  李聪  门启斐  王自文  夏伟丽  董辉 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心  上海师范大学生命与环境科学学院 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2016年03期

年份 2016 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶  DF-1细胞  真核表达 

文摘内容 为了构建柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Eimeria tenella serine/threonine protein kinase,Et STK)基因的真核表达重组质粒,并实现在DF-1细胞中的表达,以柔嫩艾美耳球虫子孢子c DNA为模板,PCR扩增Et STK基因,将扩展产物与真核表达质粒pc DNA3.1-flag连接,构建重组真核表达质粒pc DNA3.1-flag-Et STK,测序鉴定正确后,转染DF-1细胞进行表达,利用Western blot和间接免疫荧光(indirect immunofl uorescene assay,IFA)对其表达情况进行鉴定。结果表明重组质粒pc DNA3.1-flag-Et STK构建成功。Western blot显示在54 k Da处出现条带;IFA检测到特异性的绿色荧光,表明构建的重组质粒pc DNA3.1-fl ag-Et STK成功地在DF-1中实现了表达。本研究结果为深入了解柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的功能及球虫核酸疫苗提供了基础。