间接原位RT-PCR法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布

编号 zgly0001485341

文献类型 期刊论文

文献题名 间接原位RT-PCR法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布

作者 杨洪一  郭世辉  李丽丽 

作者单位 东北林业大学生命科学学院  黑龙江省林业科学研究所 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2015年03期

年份 2015 

分类号 S436.418.12 

关键词 辣椒  辣椒轻斑驳病毒  原位RT-PCR  地高辛  组织定位  cDNA 

文摘内容 为了了解辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）在辣椒组织中的分布特点,探索利用间接原位RT-PCR技术对病毒在辣椒组织中进行定位。利用改进的CTAB法从辣椒叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出PMMoV的特异片段,并经克隆测序,证明其为PMMoV的特异片段。利用PCR技术,制备出了地高辛标记的特异cDNA探针。对原位RT-PCR反应体系进行优化,经过切片制备（切片厚度7μm、应用Superfrost plus正电荷防脱载玻片）、预处理(1 mg·L-1蛋白酶K消化5 min)、RT-PCR（37℃反转录2.5h、PCR退火温度为58℃）、杂交检测,建立了应用间接原位RT-PCR技术检测PMMoV在辣椒组织中分布的方法。原位RT-PCR结果显示,叶片组织中PMMoV阳性信号主要分布于栅栏组织,其次是海绵组织,表皮组织中也有少量阳性信号。此外,叶柄中可见少量阳性信号,主要位于表皮组织。