春兰基因组DNA提取方法的研究

编号 zgly0000474750

文献类型 期刊论文

文献题名 春兰基因组DNA提取方法的研究

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 陈惠云  孙志栋  茅轶俊  王晓武  葛红 

作者单位 宁波市农科院  中国农科院蔬菜花卉研究所 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2006,4(1)

页码 135-142

年份 2006 

分类号 S792.14  Q943 

关键词 基因组DNA  提取  方法  春兰(Cymbidium  goeringii(Rchb.F)Rchb.f) 

文摘内容 本文以春兰(Cymbidium goeringii(Rchb.f)Rchb.f)为研究试材, 对植物基因组DNA提取方法中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析, 试图找出春兰基因组DNA提取的最佳方法。结果表明: 采用进口的CTAB提取效果比国产的CTAB要好, 特别适用于花药的提取, 蛋白质去除效果很好: SDS提取缓冲液配制方法很重要, 不同的SDS缓冲液配制方法, 其提取效果差异较大。春兰花苞的DNA提取得率较叶片高, 但是叶片DNA的纯度则相反, 叶片较花苞高。在提取花苞基因组DNA过程中, 增加氯仿/异戊醇抽提次数, 对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用, 但是对DNA的损失也是很明显的。从实验效果来看, 氯仿/异戊醇抽提次数以2次为宜。提取基因组DNA在异丙醇沉淀时, 采取挑取絮状沉淀的方法, 也可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响, 从而提高DNA纯度。无论是叶片还是花苞材料, 采用异丙醇沉淀5min, 一般析出的以核酸基因组DNA为主, 蛋白质为次, 核酸析出量在80%以上。继续沉淀(15min)的产物中DNA含量明显较低, 而且沉淀的纯度相对不高, 因此异丙醇沉淀时间可以缩短到10mm之内以提高DNA的纯度。使用CTAB法提取DNA时, 水浴时间至少需要30min, 过短的水浴时间会造成DNA得率的下降, 同时过长的水浴时间, 如超过1h, 则可能会引起DNA的降解, 或者最后产物中增加其他杂质, 因此, 适宜的水浴时间当为40-60min。