香菇C91—3菌凋亡相关基因24414功能域片段原核表达载体的构建

编号 zgly0000827681

文献类型 期刊论文

文献题名 香菇C91—3菌凋亡相关基因24414功能域片段原核表达载体的构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 张思若  刘奔  钟民涛  张伟  李星云  王晓丽  曹婧  宁安红  黄敏 

作者单位 大连医科大学微生物学教研室 

母体文献 中国微生态学杂志 

年卷期 2013(11)

页码 1270-1273

年份 2013 

分类号 Q782 

关键词 香菇C91-3菌  原核表达  基因克隆  蛋白  pET-32a 

文摘内容 目的构建高效快速且方便的His-标签原核表达体系, 对香菇C91-3凋亡相关基因24414功能域进行克隆。方法根据香菇C91-3凋亡相关基因24414的基因序列, 分别设计特异性上下游引物, 采用PCR方法, 以24414基因序列为模板, 扩增出24414基因的功能域序列。并将功能域基因连入pMD19-TSimpleVector克隆载体中, 进行蓝白斑筛选, 挑选出阳性菌落, 提取质粒经双酶切及PCR验证后, 进行基因测序。将克隆载体上目的基因连入pET-32a原核表达载体, 构建重组质粒。转化入E.coli JM109宿主菌, 经双酶切验证后, 进一步测序鉴定验证重组质粒。结果PCR扩增出大小为747bp的基因片段, 测序结果显示与香菇C91-3, 凋亡相关基因24414的功能域片段同源性为100%, 并成功构建了原核表达体系。结论重组原核表达载体pET-32a-24414的成功构建为进一步研究香菇C91-3凋亡相关基因24414功能域的表达纯化及生物学活性奠定了基础。