虉草ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选

编号 zgly0001626957

文献类型 期刊论文

文献题名 虉草ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选

作者 张永亮  刘鹏  骆秀梅  刘杨 

作者单位 内蒙古民族大学 

母体文献 草原与草坪 

年卷期 2016年03期

年份 2016 

分类号 S543.9 

关键词 虉草  ISSR-PCR反应体系  引物筛选 

文摘内容 22个虉草基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中dNTP、引物浓度、Taq酶和模板DNA用量4个因素及引物退火温度进行梯度试验,优化得到最佳的ISSR-PCR反应体系,即20μL反应体系中分别加入0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL),2μL 10×PCR Buffer(mg2+plus),1.5μL dNTP(2.5mmol/L),1.5μL引物(10pmol/μL),50ng模板DNA,ddH2O补足体积。以此体系对24条引物进行筛选,最终获得了多态性高,重复性好的引物12条。引物UBC808、809、811、815、818、820、826的适宜退火温度为55℃,引物835,841和842的适宜退火温度为56℃,而引物810和834的适且退火温度分别为52℃和54℃。12条引物共扩增总条带数192条,其中,多态性条带数173条,多态位点百分率89.81%。