红楠ISSR-PCR反应体系的建立和优化

编号 zgly0000729227

文献类型 期刊论文

文献题名 红楠ISSR-PCR反应体系的建立和优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 姜荣波  姜景民  刘军  陈益泰  栾启福  岳华峰 

作者单位 中国林业科学研究院亚热带林业研究所  国家林业局泡桐研究开发中心 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2011,24(2)

页码 194-199

年份 2011 

分类号 S718.46 

关键词 红楠  ISSR-PCR反应体系  单因子试验  正交设计 

文摘内容 为建立稳定的红楠ISSR-PCR最佳反应体系,在探索红楠基因组DNA提取的基础上,利用单因子试验和正交试验设计对反应体系进行优化。首先采用单因子试验对Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs的不同浓度水平进行优化,找出ISSR-PCR反应各因素的最佳浓度;同时为进一步增加结果的可靠性,采用正交试验设计方法[L9(3^4)]对Mg^2+、引物、模板DNA、dNTPs 4个因素3个浓度水平进行优化和筛选。综合两种试验方法结果,最终获得了红楠ISSR-PCR最佳反应体系: 反应体系为20μL,Taq酶0.05 U.μL^-1,Mg^2+2.0 mmol·L^-1,模板DNA 1 ng·L^-1,dNTPs 0.3 mmol·L^-1,引物(835)0.5μmol·L^-1,1×PCR缓冲液。建立重复性好、稳定性优良的ISSR-PCR反应体系,为下一步红楠群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。