葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化

编号 zgly0000738829

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 张君玉  郭大龙  龚莹  刘崇怀  李猛  张国海 

作者单位 河南科技大学林学院  中国农业科学院郑州果树研究所 

母体文献 果树学报 

年卷期 2011,28(2)

页码 209-214

年份 2011 

分类号 S663.1 

关键词 葡萄  SCoT  正交设计  单因素试验  体系优化 

文摘内容 SCoT标记是一种新型目的基因分子标记方法,采用L16(45)正交试验和单因素试验2种方法优化了葡萄SCoT-PCR反应体系,结果表明正交试验中关键影响因子为dNTPs浓度,单因素试验中为dNTPs和Mg2+浓度。综合2种方法,优化的葡萄SCoT-PCR反应体系为: Mg2+2.0 mmol·L^-1、dNTPs 0.3 mmol·L^-1、Taq酶1.0 U、引物0.3μmol·L^-1、DNA模板30 ng,总体积20μL。扩增程序为: 94℃预变性5 min;94℃变性1 min,54℃退火1 min,72℃复性2 min,34个循环;最后72℃延伸8 min。该反应体系在20个葡萄品种的验证中表现出良好的稳定性和可重复性,该反应体系的建立为葡萄种质遗传多样性评价、基因组分析、指纹图谱构建、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段。