一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

编号 zgly0000479892

文献类型 期刊论文

文献题名 一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

作者 李钧敏  金则新 

作者单位 台州学院生态研究所 

母体文献 应用生态学报 

年卷期 2006,17(11)

页码 2107-2111

年份 2006 

分类号 Q938 

关键词 土壤总微生物  DNA  抽提  PCR扩增 

文摘内容 以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA, 利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明, 该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法。采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗, 添加CaCl2和BSA, 可以去除腐殖酸; 用PEG8000沉淀DNA, 可以提高DNA质量; 采用冻融法破碎细胞, CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞, 可以保证获得大片段的DNA, 提高DNA产率。用浚方法抽提的七子花林F土壤总微生物DNA产率为9.22μg·g^-1, A260/A280为1.65, 可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术, 适宜的模板DNA浓度为0.67ng·μl^-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立, 为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能。