柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的原核表达

编号 zgly0001459636

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的原核表达

作者 段硕  李敏  陶珍珍  宋震  李中安  周常勇 

作者单位 西南大学植物保护学院  国家柑橘工程技术研究中心 

母体文献 果树学报 

年卷期 2013年05期

年份 2013 

分类号 S436.66 

关键词 柑橘碎叶病毒  CP  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 【目的】获得原核表达的柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的外壳蛋白(Coat protein,CP)。【方法】以感染CTLV的柑橘叶片总RNA为模板,根据已报道CTLV设计引物,运用一步法RT-PCR对CTLV的CP进行扩增并克隆,并将CP克隆至表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得表达蛋白。【结果】扩增测序结果显示,克隆产物CP区域序列全长714 bp,与已报道CP核苷酸序列(GenBank序列号:FJ223212)相似性达100%,推测编码238个氨基酸,表达蛋白的大小约27 kD。重组质粒经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒高效表达约30 kD蛋白,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,该蛋白稀释5000倍仍能与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)抗体发生阳性反应,证实表达蛋白为CTLV的CP。【结论】克隆了CTLV的CP,通过原核表达系统高效表达了CTLV的CP,为制备CTLV抗体奠定了基础。