牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001572134

文献类型 期刊论文

文献题名 牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用

作者 范晴  谢芝勋  谢志勤  谢丽基  黄莉  黄娇玲  张艳芳  曾婷婷  王盛  罗思思  邓显文  刘加波  庞耀珊 

作者单位 广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2018年02期

年份 2018 

分类号 S858.23 

关键词 三重二温式PCR  牛支原体  牛病毒性腹泻病毒  传染性鼻气管炎病毒  检测 

文摘内容 为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。