牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

编号 zgly0001660260

文献类型 期刊论文

文献题名 牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

作者 谢志勤  范晴  谢芝勋  张民秀  谢丽基  黄娇玲  张艳芳  曾婷婷  王盛  罗思思  邓显文  李孟  李丹  刘加波 

作者单位 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2019年01期

年份 2019 

分类号 S852.65  S852.62 

关键词 二重二温式PCR  牛支原体  牛病毒性腹泻病毒  检测 

文摘内容 为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5’端非编码区(5’-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。