柞蚕微孢子虫全长cDNA文库的构建及EST分析

编号 zgly0001478151

文献类型 期刊论文

文献题名 柞蚕微孢子虫全长cDNA文库的构建及EST分析

作者 王勇  姜义仁  王晓惠  钟亮  黄伶  秦利 

作者单位 沈阳农业大学植物保护学院  辽宁省昆虫资源工程技术研究中心  沈阳农业大学生物科学技术学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 S884.21 

关键词 柞蚕微孢子虫  cDNA文库  表达序列标签  孢子形成蛋白基因 

文摘内容 柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)。采用SMART(switching mechanism at 5’-end of RNA transcript)技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库,初始文库滴度4.2×106pfu/mL,文库容量1.0×107pfu,重组率为98.39%。随机挑取32个克隆,经PCR检测插入的片段长度在750~3 000 bp之间,平均长度>1 000 bp。挑选文库中864个克隆进行表达序列标签(EST)测序,得到626条高质量的EST,拼接后得到197条单一基因(unigenes),包含64条重叠群(contigs)和133条单一EST,冗余度为68.53%。将这些Unigenes与NCBI数据库进行比对,146条Unigenes在蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)等的基因组中比对到同源基因。在随机EST测序中克隆获得一个孢子形成蛋白(sporulation protein)基因,命名为NpSP-1。该基因ORF长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质的理论分子质量为39.2 kD,等电点5.71。柞蚕微孢子虫cDNA文库的构建及EST测序的完成,为进一步发现和研究柞蚕微孢子虫的功能基因奠定了基础。