TAIL—PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析

编号 zgly0000537645

文献类型 期刊论文

文献题名 TAIL—PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析

学科分类 220.45;经济林学

作者 许锋  程水源  王燕  李琳玲  程述汉 

作者单位 长江大学园艺园林学院  山东农业大学园艺科学与工程学院  黄冈师范学院生命科学与工程学院 

母体文献 果树学报 

年卷期 2007,24(2)

页码 237-243

年份 2007 

分类号 S664.3 

关键词 银杏  热不对称交错PCR  查尔酮合成酶基因  克隆  序列分析 

文摘内容 热不对称交错PCR(TAIL—PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL—PCR方法进行改良：(1)将TAIL技术应用于TAIL—PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板，利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列GbchsJ，以此序列设计3条特异引物，利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明，Gbchs2长1238bp，编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源，包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点。催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL—PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。