紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0001323224

文献类型 期刊论文

文献题名 紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者 王瑜  袁庆华 

作者单位 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 北京100094  北京100094 

母体文献 草地学报 

年卷期 2007年03期

年份 2007 

分类号 S541.9 

关键词 紫花苜蓿  ISSR  PCR反应体系  优化 

文摘内容 通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa L.)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃~58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃;94℃变性30 s,52℃(52℃~48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。