肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

编号 zgly0001423396

文献类型 期刊论文

文献题名 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

作者 赵素君  谢晶  曹冶  李江凌  王秋实  叶勇刚  罗丹丹  叶健强  廖党金 

作者单位 四川省畜牧科学研究院 

母体文献 中国草食动物科学 

年卷期 2012年04期

年份 2012 

分类号 S855.12 

关键词 肠出血性大肠杆菌  rfbE基因  EMA-PCR  死细菌  活细菌 

文摘内容 肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。