柑橘溃疡病菌EMA-PCR快速活体检测技术的建立

编号 zgly0001445684

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘溃疡病菌EMA-PCR快速活体检测技术的建立

作者 熊书  王中康  卢小林  殷幼平 

作者单位 重庆大学生命科学学院 

母体文献 植物保护 

年卷期 2013年04期

年份 2013 

分类号 S436.661.1 

关键词 柑橘溃疡病菌  EMA-PCR  死菌与活菌  检疫 

文摘内容 传统PCR方法不能诊断柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri Gabriel)的死活状态,往往导致假阳性检测结果。本研究将特异性核酸染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与PCR技术结合,旨在建立柑橘溃疡病活菌的快速检测技术。根据柑橘溃疡病菌独有的保守蛋白基因设计特异性引物扩增出278bp的靶带,PCR反应的检测下限为25个细胞/25μL或2.75pg/25μL。EMA-PCR结果表明:当卤钨灯曝光时间1min,EMA终浓度为1.0mg/L时,能有效抑制1.0×108 cfu/mL死菌的扩增;当EMA的浓度小于30mg/L时,EMA对上述相同浓度活菌靶基因的扩增没有明显的抑制。EMA-PCR对死活混合菌的扩增表明,活菌数在6.875×101～6.875×105 cfu/PCR范围时,荧光强度与混合体系中活菌的对数值有线性关系。基于以上建立的EMA-PCR活体检测技术,对疑似带病柑橘材料进行检测,结果发现能降低柑橘溃疡病菌检测过程中的假阳性,有望为柑橘溃疡病的检疫检验提供更科学的技术手段。