基于Gateway技术的植物表达载体的构建

编号 zgly0001390276

文献类型 期刊论文

文献题名 基于Gateway技术的植物表达载体的构建

作者 郭姗姗  张蒙  单卫星 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  西北农林科技大学植物保护学院  陕西省农业分子生物学重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年11期

年份 2010 

分类号 Q943.2 

关键词 Gateway技术  植物表达载体  瞬时表达  功能克隆 

文摘内容 【目的】为方便基于植物瞬时表达技术的高通量功能基因筛选,利用Gateway技术实现植物表达载体和表达文库的构建,将35S启动子和Gateway技术入门载体pDONR222的同源重组区连接到植物表达载体pCAMBIA0380上,构建Gateway技术兼容的植物表达载体。【方法】分别扩增35S启动子与pDONR222上attP特异识别序列之间的功能区,并将其依次连入根癌农杆菌(Agrobacterium tume faciens)介导的植物表达载体pCAM-BIA0380的多克隆位点区,利用带有attB特异识别区域的GUS基因,对构建的载体功能进行测试。【结果】成功构建了基于Gateway技术的植物表达载体p1104D;载体重组基因的选择性测试结果表明,p1104D对目的基因片段的大小无严格选择性;载体重组效率测试结果表明,p1104D重组平均滴度为5.11×105cfu/mL;GUS报告基因瞬间表达试验结果表明,改造后的载体可以实现目标基因的顺利表达。【结论】基于Gateway技术的植物表达载体p1104D的构建,为实现cDNA文库的高效构建和目标基因的高通量功能筛选提供了可能,有望推动植物-病原互作研究中关键基因的鉴定与克隆。