以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建

编号 zgly0000651261

文献类型 期刊论文

文献题名 以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 阎淑滑  周波  赵霞  李玉花 

作者单位 东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室 

母体文献 生物技术通讯 

年卷期 2010(1)

页码 35-38

年份 2010 

分类号 Q78 

关键词 Gateway技术  木糖异构酶基因  LR反应  植物表达载体 

文摘内容 目的: 构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法: 克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因,利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector(pH7WG2D)中酶切位点XbaⅠ和HindⅢ之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR-ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中,构建表达载体pCAMBIA1301-xylA-GW,利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应,获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5,并导入根癌农杆菌LBA4404中。结果: 抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5。结论: 利用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体,可简化、方便植物转基因表达载体构建。