哈茨木霉突变体T-DNA插入位点侧翼序列的克隆及其插入序列分析

编号 zgly0001390489

文献类型 期刊论文

文献题名 哈茨木霉突变体T-DNA插入位点侧翼序列的克隆及其插入序列分析

作者 黄亚丽  蒋细良  田云龙  朱昌雄 

作者单位 河北省生物研究所  中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所  中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室 

母体文献 植物保护 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S476 

关键词 木霉  T-DNA插入突变体  TAIL-PCR  序列分析 

文摘内容 利用分子生物学技术扩增T-DNA插入突变体中T-DNA侧翼未知序列是克隆突变相关基因、研究T-DNA整合方式的基础,TAIL-PCR是扩增已知序列侧翼未知序列的有效方法,本研究根据哈茨木霉的基因组特点,引用和设计了12条随机AD引物,用这些引物分别与3条右边界嵌套特异引物进行组合对哈茨木霉突变子的T-DNA侧翼未知序列进行扩增,发现不同的随机引物的扩增效率差异很大,以AD5的扩增效率最高,能扩增出80%的T-DNA插入位点的侧翼序列。随机挑取哈茨木霉T-DNA插入突变子52个,选用引物AD5对T-DNA插入位点的侧翼序列进行TAIL-PCR扩增并分析扩增序列发现,在获得的42条侧翼序列中7条只含有质粒序列、33条对应着单一的侧翼序列T-DNA、另外2条序列相同。34条T-DNA侧翼边界序列中13条保存着完整的右边界序列,21条T-DNA边界序列存在一定程度的缺失现象,说明农杆菌转化哈茨木霉的过程中T-DNA右边界存在一定程度的剪切。该研究的进行对明确农杆菌介导的木霉遗传转化过程中T-DNA的整合方式具有一定意义,为研究农杆菌转化木霉的机理奠定了实验基础。研究也精细确定了33个不同突变株的T-DNA插入位置,为后续的基因功能研究奠定基础。