桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA的提取及PCR反应体系优化

编号 zgly0001361093

文献类型 期刊论文

文献题名 桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA的提取及PCR反应体系优化

作者 袁秀洁  李会平  黄大庄  黄秋娴  苏筱雨  侯晓杰 

作者单位 河北农业大学 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S476 

关键词 桑天牛  肠道细菌基因组DNA  PCR反应体系  正交组合  单因素 

文摘内容 为了建立一套适用于桑天牛肠道细菌多样性研究的PCR反应体系和程序,采用改良的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法提取桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA,通过L16(45)正交组合试验和单因素梯度试验对MgC l2、dNTP、随机引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA的浓度和退火温度、循环次数等影响PCR扩增的重要因素进行优化。试验结果表明,采用改良的CTAB方法提取的桑天牛成虫肠道细菌DNA质量较高,适宜于PCR扩增分析。25μLPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer 2.5μL,MgC l22.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,随机引物0.48μmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,模板DNA 75 ng;退火温度60℃,循环次数30次。