本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果

编号 zgly0001566132

文献类型 期刊论文

文献题名 本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果

作者 武亚丹  张秀春  冼淑丽  余乃通  王健华  刘志昕 

作者单位 海南大学热带农林学院  中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年12期

年份 2017 

分类号 Q943.2 

关键词 本生烟  瞬时表达  干扰载体  半定量RT-PCR  沉默效果检测 

文摘内容 RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法。为快速检测RNAi载体的沉默效果,通过构建木薯eIF4E3基因的过量表达载体pAI-Ca4E3以及靶标木薯eIF4E3基因的RNAi表达载体p1300-Ca4E3,利用农杆菌注射法将表达载体在本生烟叶片中进行瞬时表达。半定量RT-PCR检测结果显示单独注射过量表达载体pAI-Ca4E3或与表达载体pCAMBIA1300共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天和第6天都能检测到木薯eIF4E3基因的高效表达,并且二者木薯eIF4E3基因表达量基本相同,说明木薯eIF4E3基因能在本生烟中高效瞬时表达,但是过量表达载体pAI-Ca4E3与干扰载体p1300-Ca4E3共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天还是第6天后都几乎检测不到木薯eIF4E3基因的表达,说明过量表达载体表达的木薯eIF4E3基因已被干扰载体有效沉默。研究结果表明,已建立同时表达靶标基因和干扰靶标基因的干扰载体的本生烟瞬时表达系统,并结合半定量RT-PCR进行RNAi载体沉默效果检测的方法。该方法在农杆菌注射4 d后就能有效的检测RNAi载体的沉默效果,具有快捷、操作简便等特点,为RNAi技术应用于基因功能研究提供简单、快捷、有效的证据。