编号 zgly0001383370
文献类型 期刊论文
文献题名 传染性支气管炎N基因克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达
作者单位 东北农业大学动物医学院 青岛易邦生物工程有限公司 中国动物卫生与流行病学中心
母体文献 中国动物检疫
年卷期 2010年04期
年份 2010
分类号 S852.65
关键词 鸡传染性支气管炎病毒(IBV) 核蛋白基因 克隆 可溶性表达
文摘内容 核衣壳蛋白(N)是鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的重要结构蛋白。根据GenBank报道的IBV的M41株的N基因序列设计一对引物,从提取的M41株的RNA中利用RT-PCR技术扩增获得了约1.23kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD18-T,经测定核苷酸序列证实N基因扩增正确,表明已成功构建pMD18-T-N。再将pMD18-T-N用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pET-32a,转化入大肠杆菌Rossetta中,用IPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳,电泳结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白,Western-blotting检测表明N蛋白可与相应IBV病毒抗体发生特异性的反应,表明N蛋白有一定的生物活性,可为用于生产检测IB的诊断试剂和研制新型IB重组亚单位疫苗奠定基础。