猪细小病毒NS1蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

编号 zgly0000807375

文献类型 期刊论文

文献题名 猪细小病毒NS1蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

作者 田莉莉  李丽 

作者单位 辽宁医学院畜牧兽医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(7)

页码 32-38

年份 2012 

分类号 S855.3 

关键词 猪细小病毒  NS1蛋白  截短表达  间接ELISA诊断方法 

文摘内容 【目的】:建立一种快速检测猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)野毒抗体的方法。【方法】:参照已发表的PPV基因组(AY502114.1)序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增PPV NS1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原,经过对间接ELISA条件的优化,建立检测PPV抗体的NS1-ELISA诊断方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的PPV NS1-ELISA诊断方法和血凝抑制试验(HI)同时对临床送检的306份血清样品进行检测,比较二者的符合率。【结果】:成功扩增了870bp的NS1基因部分片段,构建了pET30a-NS1原核表达载体,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法与猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙脑病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CS-FV)等7种常见猪病病毒的阳性血清均不发生反应;该方法检测敏感性为1∶12 800;批内重复性试验和批间重复性试验中样品的变异系数分别小于5%和10%。PPV NS1-ELISA检测方法与HI的符合率为96.2%。【结论】:制备了NS1重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,以其作为包被抗原建立的PPV NS1-ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PPV的快速诊断和流行病学调查等提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。