鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

编号 zgly0001469884

文献类型 期刊论文

文献题名 鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

作者 孙敏华  董嘉文  李林林  袁建丰  邝瑞欢  胡奇林  张建峰 

作者单位 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省兽医公共卫生公共实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2014年06期

年份 2014 

分类号 S852.65 

关键词 鹅细小病毒  NS1蛋白  ELISA 

文摘内容 本研究克隆了鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)佛山株(Foshan-2009)的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体p ET32a(+),构建重组质粒p ET32a-NS1。经转化,IPTG诱导表达及SDS-PAGE和Western blot分析表明,NS1蛋白得到了表达,并且能与抗GPV的番鸭血清发生特异性反应。通过棋盘法确定NS1蛋白包被量为0.5μg/孔,待检血清1:50稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:10 000倍稀释时ELISA反应条件最佳,并确定阴阳性临界值为0.399。该ELISA方法特异性强,与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应;重复性好,批内和批间重复试验的变异系数分别小于5%和10%;检出率高,GPV阳性番鸭血清的检出率为92%。本研究所建立的间接ELISA方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础。