采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2.1之间的相互作用

编号 zgly0001435422

文献类型 期刊论文

文献题名 采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2.1之间的相互作用

作者 潘家强  侯学文 

作者单位 华南农业大学生命科学学院植物逆境生物学研究中心  华南农业大学生命科学学院植物功能基因组与生物技术重点实验室 

母体文献 植物生理学报 

年卷期 2012年11期

年份 2012 

分类号 Q943.2 

关键词 OsRUS  酵母双杂交  相互作用  自激活 

文摘内容 为了研究OsRUS1(ROOTUV-B SENSITIVE1)与OsRUS2.1(ROOTUV-B SENSITIVE2.1)之间是否具有相互作用以及通过何种结构域相互作用,采用酵母双杂交技术开展了如下工作。根据对OsRUS1与OsRUS2.1的DUF647结构域分布的分析,分别采用分子克隆技术将OsRUS1的4个不同片段[OsRUS1(1～1782)、OsRUS1(1～504)、OsRUS1(510～1282)和Os-RUS1(1188～1782)]克隆到诱饵载体pGBKT7上,并将OsRUS2.1的4个不同片段[OsRUS2.1(1～1317)、OsRUS2.1(1～138)、OsRUS2.1(139～879)和OsRUS2.1(880～1317)]克隆到猎物载体pGADT7上,酶切和测序结果表明诱饵和猎物载体构建成功,读码框正确。将所构建的4个OsRUS1诱饵载体和4个OsRUS2.1猎物载体质粒依次转化酵母AH109,研究转化AH109菌落在营养缺陷型培养液SD-Trp-DO或SD-Leu-DO上的生长情况,以及对报告基因ADE、HIS、MEL1和LacZ的激活情况,表明它们均没有对酵母菌株AH109产生毒性和自激活活性。再将4个OsRUS1诱饵载体和4个OsRUS2.1猎物载体的16种组合分别共转化酵母AH109,共转化菌株能在二缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-DO上生长良好,但不能在四缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-Ade-His-DO上生长,也不能激活MEL1和LacZ报告基因。这些结果表明OsRUS1与OsRUS2.1之间没有直接的相互作用。