香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证

编号 zgly0001497070

文献类型 期刊论文

文献题名 香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证

作者 王祥  张秀春  余乃通  梁洁  周朋  刘志昕 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 

母体文献 植物研究 

年卷期 2015年05期

年份 2015 

分类号 S436.68 

关键词 香蕉束顶病毒  nsp基因  酵母双杂交  诱饵载体  自激活 

文摘内容 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)DNA6编码的核穿梭蛋白(nuclear shuttle protein,NSP)在病毒的侵染、复制、运输中起重要作用。为了利用酵母双杂交系统研究BBTV DNA6与寄主香蕉蛋白的互作,本实验利用两对引物的PCR扩增得到BBTV nsp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有EcoRⅠ和Bam HⅠ的酶切位点序列的DNA产物,将目的片段连接到酵母双杂交系统的p GBKT7诱饵载体中,成功获得p GBKT7-nsp,并将重组质粒p GBKT7-nsp转化入Y2H Gold酵母菌株中进行毒性检测和自激活验证。结果表明,p GBKT7-nsp没有自激活活性,同时对酵母细胞也无毒性,符合酵母双杂交诱饵质粒的要求,可用于下一步的蛋白互作实验。