伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的克隆、序列分析及表达

编号 zgly0001323653

文献类型 期刊论文

文献题名 伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的克隆、序列分析及表达

作者 薛念波  肖少波  江云波  梅小伟  刘曼莉  赵骞  罗锐  陈焕春  方六荣 

作者单位 华中农业大学动物医学院动物病毒室  华中农业大学动物医学院动物病毒室 湖北武汉430070  华中农业大学农业微生物学国家重点实验室  湖北武汉430070 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2007年12期

年份 2007 

分类号 S852.65 

关键词 伪狂犬病病毒  UL6基因  序列分析  表达 

文摘内容 以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL6全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL6全长1 938 bp,可编码646个氨基酸。将该基因克隆到插入原核表达载体pET28a的6×His下游,获得原核表达质粒pET28a-UL6,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导在大肠埃希菌中成功表达获得分子质量约70 ku的融合表达蛋白6×His-UL6,Western blot证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生特异性反应。根据测定的序列,设计一对能扩增UL6基因完整编码区的引物,PCR扩增UL6基因并将其插入真核表达载体pEGFP-C2中EGFP基因的3′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL6,转染Hela细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现,转染48 h,融合蛋白EGFP-UL6主要定位在胞浆,为进一步研究伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的结构和功能奠定了基础。