大鳞副泥鳅GPR30基因的克隆及EE2暴露对其表达的影响

编号 zgly0000823681

文献类型 期刊论文

文献题名 大鳞副泥鳅GPR30基因的克隆及EE2暴露对其表达的影响

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 章霞  张莹莹  李蒙  郑尧  王在照 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(12)

页码 21-29

年份 2013 

分类号 S917.4 Q78 

关键词 大鳞副泥鳅  GPR30  基因克隆  实时荧光定量PCR 

文摘内容 【目的】:克隆大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30)基因GPR30, 研究其在成鱼各组织中的表达状况; 用EE2(17α-ethynylestradiol)处理大鳞副泥鳅雌性幼鱼后, 检测GPR30、ERα mRNA在幼鱼肝脏和卵巢中的表达状况, 探究EE2对雌激素膜受体GPR30和经典雌激素核受体ERα基因表达的影响, 推测GPR30可能存在的生理功能。【方法】:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术, 克隆大鳞副泥鳅GPR30, 对其核苷酸序列及所编码的氨基酸序列信息和进化关系进行分析; 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法, 研究GPR30 mRNA在大鳞副泥鳅成鱼性腺、肠道、肌肉、肾脏、脑、肝脏、鳃、眼睛等组织中的表达状况, 以及经不同质量浓度(1, 5, 25 ng/L)EE2处理后雌性幼鱼肝脏和卵巢中GPR30和ERα mRNA的表达。【结果】:克隆获得了GPR30, 该基因全长2 152 bp, 阅读框全长1 062 bp, 编码353个氨基酸, 该基因氨基酸序列与斑马鱼的GPR30氨基酸序列相似性最高, 达92.9%。GPR30氨基酸序列的比对结果显示, 大鳞副泥鳅与其他脊椎动物的GPR30结构域一致。荧光定量PCR分析表明, GPR30在大鳞副泥鳅成鱼卵巢中表达最高, 在雄鱼肠道中表达最低, 且GPR30 mRNA在雌雄大鳞副泥鳅的性腺中差异性表达, 在卵巢中的表达量较精巢中高702倍。EE2暴露试验显示, 在5 ng/L EE2 处理组的卵巢及1和5 ng/L EE2处理组的肝脏中, GPR30有略微增长; 随着EE2质量浓度的增高, ERαmRNA在肝脏中的相对表达水平较对照组显著增长。【结论】:成功克隆了大鳞副泥鳅GPR30, 其与哺乳动物的GPR30有相似的结构和功能, 可能与雌激素效应存在密切关系。在基因转录水平上, GPR30与ERα可能不存在直接的显著相关关系。