国槐苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、反义表达载体构建及遗传转化

编号 zgly0000554547

文献类型 期刊论文

文献题名 国槐苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、反义表达载体构建及遗传转化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 许锋  朱俊  张风霞  王燕  程水源  程述汉 

作者单位 长江大学园艺园林学院  山东农业大学园艺科学与工程学院  黄冈师范学院生命科学与工程学院 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2008,21(5)

页码 611-618

年份 2008 

分类号 S718.46 

关键词 国槐  生根能力  PAL基因  反义表达载体  遗传转化  总多酚  类黄酮 

文摘内容 根据其它植物PAL基因的保守区域，设计一对兼并引物，采用RT-PCR方法从国槐中克隆了一个长866bp的PAL基因片段，命名为SjPAL。序列分析发现SjPAL多肽与其它植物的PAL氨基酸序列高度同源(87％以上)，且包含与水稻和拟南芥的PAL类似的活性位点。系统进化树分析表明SjPAL与豆科植物的PAL亲缘关系较近。RT-PCR结果显示，SjPAL在根和茎的表达量约为叶中的3倍。利用反义RNA技术将SjPAL基因克隆至植物表达载体pBI121，构建了SjPAL反义RNA植物表达载体pBI121-PAL，通过根癌农杆菌EHA105将其导入拟南芥基因组，对获得的抗性植株进行PCR鉴定、Northern杂交分析、PAL活性分析以及总多酚含量和类黄酮含量分析。结果表明，该反义RNA已整合到拟南芥基因组中，转基因拟南芥的PAL基因表达量、单位材料PAL三活性、总多酚含量和类黄酮含量均显著低于野生型对照。本研究为下一步利用该基因反义表达载体转化国槐，通过调节酚类物质含量提高其在再生体系中的生根能力提供了试验依据。