苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备

编号 zgly0001378651

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备

作者 宋艳苏  郑银英  李丽娜  王国平  洪霓 

作者单位 华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室  石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室 

母体文献 果树学报 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S436.61 

关键词 苹果茎沟病毒  cp基因  原核表达  抗血清 

文摘内容 构建了来源于梨的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)分离物P-4-1-69和P-L2的原核表达载体pET-P-4-1-69和pET-P-L2,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol.L-1 IPTG下诱导表达。SDS-PAGE和用商业化ASGV抗体对诱导表达产物进行Western Blot分析结果表明,2个分离物的外壳蛋白基因(cp基因)在大肠杆菌中成功地进行了高效表达,重组外壳蛋白的大小约为31 ku。分别用含分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的胶条免疫大耳白兔,制备了抗ASGV重组外壳蛋白的抗血清。采用间接ELISA法用所制备的抗血清对回收的重组外壳蛋白进行检测,当抗分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的抗血清分别稀释512 000倍和64 000倍时,检测结果仍为阳性。Western Blot分析和组织免疫印迹检测(Tissue blotting immunoassay,TBIA)结果表明,纯化的抗体具有较强的特异性,可有效检测梨样品中的ASGV。