光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

编号 zgly0001414344

文献类型 期刊论文

文献题名 光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

作者 陈争  姜小凤  童再康 

作者单位 浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地 

母体文献 浙江农林大学学报 

年卷期 2012年06期

年份 2012 

分类号 S792.15 

关键词 林木育种学  光皮桦  EST-SSR  PCR反应体系  正交设计 

文摘内容 为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg.L-1DNA模板,0.500μmol.L-1引物,1.250 mmol.L-1Mg2+,0.250mmol.L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat.L-1rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。