羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达

编号 zgly0000652807

文献类型 期刊论文

文献题名 羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 蓝兴国  杨佳  王艳红  李玉花 

作者单位 东北林业大学生命科学学院 

母体文献 生物技术通讯 

年卷期 2010(2)

页码 210-212

年份 2010 

分类号 Q78 

关键词 羽衣甘蓝  自交不亲和  S13-b位点受体激酶  原核表达  纯化 

文摘内容 目的: 分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析, 构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法: 提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA, 用RT-PCR法分离SRK13-b基因; 将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中, 构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT, 转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株, 经0.1mmol/L IPTG诱导, 用Ni—NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果: 分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571 bp, 编码856个氨基酸, GenBank收录号为EU180597; 对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化, SDS—PAGE显示相对分子质量约43×10^3的蛋白质特异表达, 对表达产物进行分离纯化, 获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论: 羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达, 为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。