柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

编号 zgly0001553723

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

作者 赵恒燕  关桂静  周常勇  于云奇  王洪苏  李中安  刘金香 

作者单位 西南大学/中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2017年07期

年份 2017 

分类号 S436.66 

关键词 柑橘  柑橘黄化脉明病毒  柑橘衰退病毒  二重RT-PCR  检测 

文摘内容 选用柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）和柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL-1总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL-1总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。