柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001526571

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

作者 周彦  陈洪明  王雪峰  李中安  王亮  周常勇 

作者单位 西南大学柑橘研究所  四川省安岳县柠檬科学技术研究所 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S436.66 

关键词 柑橘黄化脉明病毒  巢式RT-PCR  检测 

文摘内容 为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对采自不同柑橘品种的54个CYVCV疑似样品进行了检测。结果表明,CYVCV巢式RT-PCR检测中,以55℃和60℃分别作为第1轮和第2轮扩增的退火温度时检测效果最佳;该方法检测样品中病毒总核酸的最低浓度为2.40μg/L,灵敏度较RT-PCR提高100倍。在CYVCV疑似样品检测中,巢式RT-PCR和RT-PCR的阳性检出率分别为59.26%和57.41%,前者更适用于检测不同来源的CYVCV。当尤力克柠檬、锦橙北碚-447、天草和台湾椪柑嫁接接种CYVCV后,巢式RT-PCR比RT-PCR提前10~30 d检测出病毒。表明所建立的CYVCV巢式RT-PCR检测方法适用于田间病树的早期诊断。