非洲马瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

编号 zgly0001448793

文献类型 期刊论文

文献题名 非洲马瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者 赵文华  杨仕标  李富祥 

作者单位 云南省畜牧兽医科学院 国家外来动物疫病诊断实验室 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2013年12期

年份 2013 

分类号 S852.65 

关键词 非洲马瘟病毒  血清型  SYBR Green Ⅰ  实时荧光定量RT-PCR 

文摘内容 非洲马瘟病毒(AHSV)为双股RNA病毒,能感染所有马科动物。为建立一种AHSV快速检测方法,根据GenBank及作者所测AHSV 9个血清型VP7-ORF全长核苷酸序列,设计一对位于AHSV基因组S7片段的特异引物,然后进行荧光定量检测。经试验,证实该对引物对9种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,能检出特异荧光信号,而对与AHSV同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血症病毒(EHDV)及正常马淋巴组织和阴性对照均无扩增,无有效荧光信号可检出。以国家外来动物疫病诊断实验室已构建好的AHSV 9型pMD18-T-VP7质粒为标准品可建立良好的标准曲线,实现对检测样本的实时定量。本研究建立了模板预变性结合三步法敏感特异的AHSV实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,检测灵敏度可达102拷贝/μL。