家蝇幼虫消减文库的构建及差异表达基因的鉴定

编号 zgly0001381450

文献类型 期刊论文

文献题名 家蝇幼虫消减文库的构建及差异表达基因的鉴定

作者 李殿香  康翠洁  张伟  王金星  赵小凡 

作者单位 济南大学医学与生命科学学院  山东大学生命科学学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2010年06期

年份 2010 

分类号 Q963 

关键词 家蝇  抑制性消减杂交  cDNA消减文库  差异表达基因  半定量RT-PCR 

文摘内容 为了鉴定家蝇Musca domestica免疫相关基因,应用抑制性消减杂交技术,构建刺激家蝇幼虫差异表达cDNA消减文库。以大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus诱导12h的家蝇幼虫与未诱导的家蝇幼虫为消减杂交对象,获得了差异表达基因的cDNA片段,将其与T/A载体连接并转化大肠杆菌DH5α,构建了刺激家蝇幼虫cDNA消减文库。PCR检测发现,文库的阳性克隆中插入的cDNA片段大小在200～1000bp之间,随机挑选了161个含大小不等差异片段的克隆进行测序和同源性分析,鉴定了36种蛋白的基因片段,包括抗菌肽、酶、核糖体蛋白、其他功能蛋白以及功能不明的蛋白。用半定量RT-PCR分析了其中6种蛋白基因的表达,结果显示:防御素和攻击素基因在细菌刺激后24h内明显上调表达,而溶菌酶、酚氧化酶原活化因子、糜蛋白酶和蛋白质合成起始因子基因在细菌刺激后0-4h内表达受抑制,12h后上调表达。该研究结果为家蝇免疫相关基因的克隆和家蝇免疫防御机制的探讨奠定了良好的基础。