肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

编号 zgly0000598816

文献类型 期刊论文

文献题名 肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

作者 孙培明  吴晓东  赵永刚  刘雨田  王志亮  鲍恩东 

作者单位 南京农业大学动物医学院  农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心  临沂大学农林学院 

母体文献 中国农业科学 

年卷期 2008,41(7)

页码 2154-2161

年份 2008 

分类号 S852.43  Q78 

关键词 热休克蛋白70  原核表达  单克隆抗体制备  肉鸡 

文摘内容 【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。【方法】利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a(＋)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1。【结论】免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1是一种理想的抗体。