鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因在大肠杆菌中的表达及产物免疫活性检测

编号 zgly0001330630

文献类型 期刊论文

文献题名 鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因在大肠杆菌中的表达及产物免疫活性检测

作者 张淑霞  贺秀媛  崔保安  王建华 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院  河南农业大学牧医工程学院  西北农林科技大学动物科技学院 陕西杨凌712100  河南郑州450002  陕西杨凌712100 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2007年04期

年份 2007 

分类号 S852.65 

关键词 鸡传染性支气管炎病毒  N基因  免疫活性 

文摘内容 鸡传染性支气管炎病毒HN99株核蛋白(N)基因PCR产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切,克隆入大肠杆菌原核表达载体pMAL-p2X,构建重组表达质粒pMAL-p2X-N,转化大肠杆菌TB1并进行诱导表达。通过pMALTM融合蛋白纯化系统对表达产物进行非变性纯化,将纯化的N蛋白按常规方法免疫新西兰大白兔,制备兔抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的多克隆抗体,并用ELISA法检测其生物活性。结果表明,表达的重组核蛋门纯化后出现2条带,相对分子质量分别约为92和82 ku,与Western blot出现的2条蛋白带一致;纯化的重组蛋白经裂解因子作用后,出现2条蛋白带,相对分子质量分别为45和35 ku,与预期结果相符合;制备的多克隆抗体可与不同鸡传染性支气管炎病毒株发生反应,与亲本毒株的反应性略高于与其他毒株的反应性。以上结果表明,原核表达的可溶性N蛋白具有高度的生物活性,有望作为新的基因工程抗原用于鸡传染性支气管炎病毒的群特异性诊断。