质粒pUC19-CM-D的构建及应用

编号 zgly0000649852

文献类型 期刊论文

文献题名 质粒pUC19-CM-D的构建及应用

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 卢福芝  孙靓  黄靖华  黄艳燕  黄日波  Fu-zhi  Jing-hua  Yan-yan  Ri-bo 

作者单位 广西大学化学与化工学院  广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心 

母体文献 农业科学与技术: 英文版 

年卷期 2010(5)

年份 2010 

分类号 S 

关键词 自杀质粒  构建  抗性基因  鼠李糖乳杆菌  resistant  gene  gene  deletion  缺陷型  菌株  载体  基因替换  基因缺失  乳酸脱氢酶基因  一次筛选  基因功能研究  工程菌  方法  target  gene  application  fragments  研究对象 

文摘内容 [目的]用克降载体pUC19构建乳杆菌自杀质粒及乳杆菌基因缺失工程菌.[方法]以鼠李糖乳杆菌为研究对象,在质粒pUC19的多克隆位点插入氯霉素抗性基因构建pUC19-CCM载体;在pUC19-CM载体氯霉抗性基因的两侧均添加1个用于同源重组的同源臂,再构建成自杀质粒pUC19-CM-D.将自杀质粒pUC19-CM-D.将自杀质粒pUC19-CM-D转化乳杆菌进行抗生筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株.[结果]通过改造pUC19质粒,获得了可应用于构建鼠李糖乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因缺陷型菌株的自杀质粒pUC19-CM-D.运用抗性基因替换方法来构建基因缺陷型菌株,在一定程度上避免了质粒整合带来的问题,同时提供了一个筛选标记,能够通过一次筛选即可得到缺陷型菌株.这种自杀质粒的改造和基因缺陷型菌株的构建方法具有通用性,可以应用于其他的载体和菌株.[结论]pUC19-CM-D质粒的构建及应用为乳杆菌基因缺失工程菌的构建提供了1个快速有效的手段,也为乳杆菌基因功能研究奠定了基础.
Abstract:
[Objective] The aims were to construct a new suicide plasmid of Lactobacillus and gene deletion engineering bacteria of Lactobacillus with pUC19 vector,[Methods]pUC19-CM was constructed by inserting a chloramphenicol resistant gene into the multi-cloning site of pUC19,and then two homologous fragments were cloned into each side of the pUC19-CM to construct suicide plasmid pUC19-CM-D.[Results]A replacement mutant strain,whose target gene was replaced by resistant gene,could be obtained by transforming the suicide plasmid pUC19-CMD into Lactobacillus for resistance screening. [Conclusion] The construction and application of pUC19-CM-D provided a fast and efficient means of construction of gene deletion engineering bacteria of Lactobacillus,and laid a foundation for study of gene function of Lactobacillus.