3种大白菜病毒多重RT-PCR检测技术的建立

编号 zgly0001570068

文献类型 期刊论文

文献题名 3种大白菜病毒多重RT-PCR检测技术的建立

作者 刘欢  李春游  刘斐  郝兴安  吴云锋 

作者单位 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室植保资源与病虫害治理教育部重点实验室植物保护学院  周至县农业技术推广中心  咸阳市农业科学研究院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年09期

年份 2017 

分类号 S436.341.1 

关键词 大白菜  芜菁花叶病毒  烟草花叶病毒  黄瓜花叶病毒  多重RT-PCR检测 

文摘内容 【目的】建立3种大白菜病毒病多重RT-PCR检测技术,为病毒病快速检测、白菜病毒病防治与抗病育种提供参考。【方法】针对我国大白菜芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus,TuMV）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）3种病毒的外壳蛋白（CP）基因保守区序列,设计特异性检测引物,从多重RT-PCR（mRT-PCR）扩增引物、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶及dNTPs浓度、退火温度、延伸时间和循环次数等方面对RT-PCR检测技术进行优化。【结果】在dNTPs浓度为0.24 mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.12U/μL,退火温度为52℃,延伸时间为30s,循环30次,即可成功地在一个体系中对TuMV、TMV和CMV 3种病毒复合侵染的大白菜病样进行多重RT-PCR扩增,扩增得到228,305和460bp3条特异性条带,其大小与试验设计相符合。灵敏度接近单重RT-PCR（sRT-PCR）,体现了多重RT-PCR的优越性。【结论】建立了能同时检测大白菜样品中TuMV、TMV和CMV的多重RT-PCR检测体系,该多重RT-PCR方法能对田间大白菜样品进行3种病毒的准确、快速、高效检测。