青枯菌M5菌株特异基因组消减文库的构建

编号 zgly0000592838

文献类型 期刊论文

文献题名 青枯菌M5菌株特异基因组消减文库的构建

作者 李双双  孙晓甜  翟静娟  郜刚  闫桂琴 

作者单位 山西师范大学生命科学学院生物多样性研究所  中国科学院遗传与发育生物学研究所 

母体文献 中国农学通报 

年卷期 2008,24(3)

页码 62-66

年份 2008 

分类号 S888.713 

关键词 青枯菌  抑制消减杂交  文库  基因组 

文摘内容 为筛选青枯菌M5菌株特有的序列,利用SSH技术对青枯菌生理小种5号菌株M5(tester)和生理小种1号菌株GMI1000(driver)基因组进行了比较。分别提取二者基因组DNA,RsaⅠ酶切,将酶切后M5菌株DNA分为两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR扩增,并检测连接效率与消减效率。将获得的消减PCR产物,即差异基因/差异DNA片段,与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5α感受态细胞,建立消减文库。随机挑取96个白色克隆,经菌液PCR法测定,80个为预期阳性,含有预期的插入片段。首次构建了青枯菌M5菌株特异基因的抑制消减文库,为进一步筛选、克隆青枯菌M5菌株特异核苷酸片段奠定了基础。