桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定

编号 zgly0001444083

文献类型 期刊论文

文献题名 桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定

作者 吴军帅  丛丽君  段艳欣  董晓颖  王滨  李培环 

作者单位 青岛农业大学园艺学院·青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室 

母体文献 果树学报 

年卷期 2013年02期

年份 2013 

分类号 S662.1 

关键词 桃  PpCuZnSOD  原核表达  纯化  鉴定 

文摘内容 【目的】为了实现桃铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的高效表达,获得表达稳定、蛋白纯度高、活性强的工程菌,【方法】将前期获得的PpCuZnSOD基因(GenBank登录号:JX217743)重组到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,镍柱亲和层析纯化,并采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度,黄嘌呤氧化法分析其酶活。【结果】成功的构建了原核表达载体pET-32a(+)-PpCuZnSOD,并获得分子质量约为35 kDa的诱导表达产物,纯化后融合蛋白浓度为183.7 mg·L-1,活性为5.23×103U·mg-1。【结论】成功构建了桃pET-32a(+)-PpCuZnSOD原核表达载体,表达量高、稳定性强,重组表达产物具有较高CuZnSOD酶活性,为桃CuZnSOD酶的进一步研究奠定了基础。