新霉素磷酸转移酶基因npt Ⅱ的原核表达、蛋白纯化及其活性鉴定

编号 zgly0000711472

文献类型 期刊论文

文献题名 新霉素磷酸转移酶基因npt Ⅱ的原核表达、蛋白纯化及其活性鉴定

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王玲  刘连盟  傅强  黄世文 

作者单位 中国水稻研究所 

母体文献 中国水稻科学 

年卷期 2011,25(3)

页码 326-330

年份 2011 

分类号 Q943.2 S511.03 

关键词 新霉素磷酸转移酶基因  原核表达  包涵体  可溶性蛋白  纯化 

文摘内容 通过PCR方法从pCAMBIA1305载体上克隆了新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的全编码序列,并插入到原核表达载体pET30a(+)中,构建了重组质粒pET30a-nptⅡ。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,获得了相对分子量为35kD的表达蛋白,约占全菌总蛋白的45%。表达蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。用5mmol/L二硫苏糖醇和1%十二烷基肌氨酸钠变性溶解包涵体,经透析后复性获得了可溶性重组蛋白。将可溶的表达蛋白用Ni 2+-NTA亲和层析纯化,获得纯化的NPTⅡ蛋白,电泳谱带扫描分析表明蛋白纯度达95%以上。体外活性检测显示,NPTⅡ蛋白具有良好的生物活性,在浓度30μg/mL以上时可使卡拉霉素失去抑菌活性。