长春花萜类吲哚生物碱生物合成途径中重要酶(DXR、SLS、G10H、STR)基因的克隆与表达

编号 zgly0000518341

文献类型 期刊论文

文献题名 长春花萜类吲哚生物碱生物合成途径中重要酶(DXR、SLS、G10H、STR)基因的克隆与表达

作者 韩梅  赵博  安志刚  Thomas  Rausch  祖元刚 

作者单位 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室  海德堡大学植物学研究所 

母体文献 植物研究 

年卷期 2007,27(5)

页码 564-568

年份 2007 

分类号 Q946.88 

关键词 长春花  萜类吲哚生物碱  生物合成途径  Gateway克隆 

文摘内容 以分离提取的2周龄长春花植物幼苗总RNA为模板，经两步Gateway-PCR反应扩增得到长春花萜类吲哚生物碱合成途径中编码重要酶：5-磷酸脱氧木酮糖还原酶(DXR)、次番木鳖苷合成酶(SLS)、栊牛儿醇-10羟化酶(G10H)和异胡豆苷合成酶(STR)的cDNA基因片段。利用BP重组酶将扩增片段克隆到Gateway化的入门载体pDONR201中，并进行测序验证。测序后的基因通过LR重组酶的作用转移到带有HIS标签的目标载体pETG10A中，构成重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导得到了高效表达，通过Ni-TED树脂纯化方法得到了高纯度的蛋白。